細(xì)胞因子已廣泛應(yīng)用于臨床的已有EPO、IFN-α、G-CSF、GM-CSF以及試用于臨床的白細(xì)胞介素等。為了研究細(xì)胞因子在生理系統(tǒng)的作用以及了解細(xì)胞因子產(chǎn)品用于臨床治療的效果，進(jìn)行細(xì)胞因子的檢測就很重要，而且用于臨床診斷的細(xì)胞因子分析方法必須適用于常規(guī)操作。
 

　　細(xì)胞因子生物學(xué)活性檢測和濃度測定的分析方法主要有以下幾類：
 

　　1.1 生物分析法
 

　　生物分析法方便，敏感性高，但所有細(xì)胞系有可能受幾種細(xì)胞因子的影響，特異性則較差。又由于可溶性細(xì)胞因子受體等抑制劑的存在，使生物分析法可能低估細(xì)胞因子的活性。常用的方法有2種:(1)依賴性細(xì)胞株增敏實(shí)驗(yàn)。一些腫瘤細(xì)胞株依賴于細(xì)胞因子方能在體外增殖，如TF-1細(xì)胞株依賴于GM-CSF和IL-3[4，5] ，CTLL細(xì)胞株依賴于IL-2，TTD-1細(xì)胞株依賴于IL-6等 [4] ?？衫眠@些依賴株檢測相應(yīng)的細(xì)胞因子。但是，并非所有細(xì)胞因子均有相應(yīng)的依賴株，因此限制了此法的應(yīng)用。(2)功能檢測實(shí)驗(yàn)。利用一些細(xì)胞因子的功能特性而建立相應(yīng)的活性測定方法。如IFN抗病毒實(shí)驗(yàn)和tnf對(duì)L 929 細(xì)胞的殺傷作用等[4] 。此外，生物分析法還有骨髓集落形成實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞毒或細(xì)胞抑制實(shí)驗(yàn)，次級(jí)分子分泌的誘導(dǎo)，化學(xué)趨化和細(xì)胞因子分泌性的抑制實(shí)驗(yàn)等。
 

　　1.2 免疫分析法
 

　　利用抗原機(jī)體反應(yīng)的原理，制備出抗細(xì)胞因子的單抗或多抗，可進(jìn)行細(xì)胞因子的免疫檢測，它包括放免實(shí)驗(yàn)(RIA)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)等。其優(yōu)點(diǎn)是高特異性、高靈敏度、操作簡便。缺點(diǎn)是不能證明被測細(xì)胞因子是否為具有完整生物活性結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)而非變性蛋白質(zhì)。
 

　　1.3 CKmRNA的測定
 

　　(1)分子雜交實(shí)驗(yàn):首先制備出細(xì)胞因子的基因探針，通過分子雜交檢測細(xì)胞內(nèi)CKmRNA的表達(dá)。(2)逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法技術(shù):可快速、靈敏地檢測表達(dá)很低的CKmRNA，并可同時(shí)測定同一樣本中多種CKmRNA，操作過程包括細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞的RNA提取，mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以cDNA為模板，在細(xì)胞因子引物的引導(dǎo)下，即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。根據(jù)定量CKmRNA方法和原理的不同，可分為半定量PCR法，競爭性定量PCR法，內(nèi)參標(biāo)定量PCR法，HPLC-PCR法和酶聯(lián)免疫定量PCR法 [6] 。目前市售的商品試劑盒已能用于大多數(shù)細(xì)胞因子的檢測，但因其價(jià)格昂貴而阻礙了其廣泛使用。同時(shí)，人細(xì)胞因子的測定仍存在許多問題，檢測方法選擇不當(dāng)可能得到不一致的結(jié)果，有時(shí)有必要選擇一個(gè)以上的檢測方法測定細(xì)胞因子。
 

　　2.靈敏度
 

　　細(xì)胞因子具有很強(qiáng)的生物學(xué)活性，其生物分析法的靈敏度高。然而，在測定血漿中細(xì)胞因子正常濃度時(shí)，難以確定免疫分析法令人滿意的靈敏度。不同細(xì)胞因子的參考值變化很大，難以定義其參考值范圍。如Damas等在研究細(xì)胞因子與敗血癥時(shí)，使用兩步免疫放射測定實(shí)驗(yàn)(IRˉMA)測定IL-6(靈敏度:5ng/ml)一步IRMA法測定TNF-α(靈敏度:5ng/L)和IL-1β(靈敏度:4ng/L)，在正常血清中未測得上述細(xì)胞因子。而Riikonen等使用具有相似檢測限的RIA法，在20例健康兒童中，IL-1β的平均濃度為12.1ng/L，IL-6的平均濃度為83ng/L;在71例健康兒童中，TNF-α的平均濃度為40±2ng/L。由此可見，不同的免疫分析方法之間存在較大的差異，其靈敏度變化可能是由于其準(zhǔn)確度和特異性的不同而引起。